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过加热前后DNA与RNA在260nm处吸光值的变 化来区分DNA和RNA。
七、某生物化学家发现并纯化了一种新的酶，纯化过程及结果如下表： 操作程序总蛋白（mg）活性（U） 1。粗提取 200004000000 2。盐析沉淀50003000000 3。pH沉淀40001000000 4。离子交换层析 200800000 5。亲和层析50750000 6。排阻层析45675000 根据表中结果： a）计算每一步纯化程序后酶的比活性。 b）指出哪一步对酶的纯化最有效。
c）指出哪一步对酶的纯化最无效。 d）表中结果能否说明该酶已被纯化？若估计酶的纯化程度还需要做些什么？ e）若该单纯酶由 682个氨基酸残基组成，该酶的分子量约为多少？（1997，北医） 考点：酶活力测定及酶的分离纯化。 解析：a）酶含量须用酶活力来表示，即在 1分钟内转化1 微摩尔的底物所需的酶量为一个 单位，而每毫克酶蛋白所具有的酶活力，称比活力，用单位/毫克蛋白表示。 故每一步纯化程序后酶的比活性为1。4000000〖〗20000＝200（U/mg） 2。3000000〖〗5000＝600（U/mg） 3。1000000〖〗4000＝250（U/mg） 4。800000〖〗200＝4000（U/mg） 5。750000〖〗50＝15000（U/mg） 6。675000〖〗45＝15000（U/mg） b）对同一种酶来说，比活力愈高，表明酶愈纯，从第 4 步到第 5 步酶的比活力明显提高， 故亲和层析一步对酶的纯化最有效。 c）从第 5步到第 6步，酶的比活力无变化，所以第 6步对酶的纯化最无效。 d）因为第 5 步和第 6 步的比活力一样，也就是说经过排阻层析后酶的纯度无变化，所以该 酶基本上已被纯化。 e）一般每个氨基酸残基含一个氮原子，原子量为 14，而每种蛋白质分子的含氮量都约为 16％故，设蛋白质分子量为 x，则14×682〖〗x＝16％，x=59675。
八、已知某多肽组成是 Ala5、Lys1，Phe1 与 2，4…二硝基氟苯（DNFB）反应后再酸解产 生一个游离的DNFB…Ala，胰蛋白酶解得一个三肽：Lys1；Ala2和一个四肽Ala3、Phe1， 整个多肽经糜蛋白酶解产生一个六肽和一个游离氨基酸，写出这个多肽的一级结构（1992 北医） 考点：氨基酸序列分析 解析：1。多肽与DNFB反应再酸解产生一个游离的DNFB…Ala，说明此肽的N末端氨基酸 残基是Ala。 2。胰蛋白酸水解 Lys、Arg 羧基侧的肽键，题中多肽无Arg。且被此酸水解成一个三肽和一 个四肽，说明第3位氨基酸残基是Lys。 3。糜蛋白酶水解 Phe、Tyr、Trp 羧基侧的肽键，此多肽中只存在Phe，且被此酶水解成一 个六肽和一个游离氨基酸，说明其第6位氨基酸残基是Phe。 4。此多肽一共有 7 个氨基酸残基组成5 个Ala，1 个Lys，1 个 Phe，所以剩余的2、4、5、 7 位全是 Ala。故此多肽一级结构为（从N 端到 C端）：Ala…Ala…Lys…Ala…Ala…Phe…Ala 九、磷酸酶、磷酸化酶、激酶、蛋白激酶有何区别？各举一例（1994北医） 考点：对酶定义的理解 解析：磷酸酶是将酶或蛋白质上磷酸基水解下来的酶，如磷蛋白磷酸酶可将磷酸化的糖原合 酶上的磷酸基水解掉使其恢复活性。 磷酸化酶是将某一物质水解并将其磷酸化的酶，如糖原磷酸化酶是在糖原分解过程中从糖链 上水解掉葡萄糖生成1…磷酸葡萄糖的酶。 激酶包括多种，能将 ATP 磷酸基转移给接受体的反应都由激酶催化，如己糖激酶即可催化 葡萄糖生成6…磷酸葡萄糖。 蛋白激酶也是激酶的一种，它多是在酶活性调节中发挥作用，将酶的丝氨酸、苏氨酸等残基 磷酸化，发挥共价修饰作用，使其活性升高或降低，如蛋白激酶 A 可将糖原合成酶磷酸化 使其失去活性。 十、从以下几方面对蛋白质及DNA进行比较（1999北医）
（1）分子组成（2）一、二级结构（3）主要生理功能 十一、叙述tRNA一、二级结构要点及其与当前已知的分子结构与功能的关系（1999北医） 考点：tRNA的分子结构与功能 解析：tRNA一级结构：由核糖核苷酸通过磷酸二酯键连成的单链分子 二级结构：核苷酸链中存在着一些局部互补配对的区域，可以形成局部双链，进而形成一种 发夹结构，局部配对的双链构成茎状，中间不配对的部分膨出成环状，故其二级结构成三叶 草形，左右两侧稀有碱基环称二氢尿嘧啶环和假尿嘧啶环，位于下方的称反密码环，此环中 间3个碱基即为反密码子，3′端为CCA…OH末端。 与分子功能的关系：tRNA功能是在细胞蛋白质合成过程中作为各种氨基酸的载体并将其转 呈给 mRNA，具体来说靠其 3′末端 CCA…OH 与氨基酸结合成氨基酰…tRNA，反密码子与 mRNA上的密码子形成碱基互补，蛋白质生物合成时靠反密码子辨认 mRNA上密码子，然 后携带密码子编码的氨基酸至核蛋白体，参与蛋白质合成。 十二、（1）何谓酶蛋白、辅酶、活性部位？它们在酶催化反应中起何作用？ （2）何谓竞争性抑制？就酶反应动力学有关参数指出它与非竞争性抑制的区别（1999 北医） 考点：酶的分子结构及功能，抑制剂对酶促反应速度的影响 解析：（1）酶分单纯酶、结合酶，后者由蛋白质和非蛋白质部分组成，其中的蛋白质部分即 为酶蛋白。非蛋白质部分中与酶蛋白结合疏松，可用透析等方法除去的称辅酶，酶分子中必 需基团空间结构上相互靠近，组成具有特定空间结构的区域，这一区域称酶活性中心。 酶蛋白决定反应特异性，辅酶决定反应种类与性质，活性中心包括催化基团和结合基团，能 与底物结合，并催化底物发生化学反应将其转变为产物。 （2）与底物结构相似，可与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物结合的即为竞争性抑 制剂它能使反应Vmax不变Km值变大，故这种抑制作用可通过增加底物浓度来消除，非 竞争性抑制剂使反应 Vmax 降低，Km 不变，其与酶活性中心外的必需基团结合，不影响 酶与底物的结合，故 Km 值不变，因抑制剂与底物之间无竞争关系，故此抑制作用不能通 过增加底物浓度来消除。 十三、测定酶活性时，对底物浓度有何要求，为什么（1991北医） 考点：酶活性测定的条件 解析：测定酶活性时，首先底物的量要足够，以使酶被充分饱和，获取最高反应速度，充分 反映待测酶的活力，但底物量也不能过多，以 20～100Km 为宜，过高的底物浓度有时反 会对酶有抑制作用，这是因为同一酶分子上同时结合几个作用物分子，使酶分子的诸多必需 基团不能针对一个作用物分子进行催化攻击。 十四、简要说明，设计一个定量测定胰液中脂肪酶活性的方法需要考虑哪些因素（1995 北 医） 考点：酶活性的测定 热点：因为在生物组织中，酶蛋白含量甚微，所以我们要确定酶量的多寡主要是测定酶活性， 即在规定的实验条件下，测定该酶催化反应的速度，用单位时间内底物的消耗或产物的生成 量表示，因而测定过程中，要保持一定的实验条件，这就是酶活性测定中最重要的内容。 解析：许多因素可影响酶促反应速度，故要测胰液中脂肪酶活性需要考虑如下因素，使各种 因素相对恒定： ①酶的样品应作适当的处理； ②底物的量要足够，使酶被充分饱和，以充分反映待测酶活力； ③应保持酶足够的浓度； ④根据反应时间选择最适反应温度；
⑤根据不同底物、缓冲液选择最适pH值； ⑥反应体系中应有适当的辅助因子、激活剂，除去抑制剂； ⑦可以终止反应或有连续监测装置能追踪反应过程 自测题及模拟训练题 选择： 一、胰蛋白酶主要水解（）（1995北医） A。赖氨酸或精氨酸的羧基组成的肽键 B。氨基末端肽键 C。芳香族氨基酸残基组成的肽键 D。中性脂肪族氨基酸组成的肽键 E。羧基末端肽键 答案：A 考点：多肽链中氨基酸序列分析常用的酶 解析：蛋白质进行氨基酸序列分析除了应知道其基本步骤外，还应知道每一步基本原理及其 中用到的试剂或酶，这些酶作用位点的区别，如：胰凝乳蛋白酶水解芳香族氨基酸羧基侧的 肽键，溴化氰水解甲硫氨酸羧基侧的肽键；测定氨基末端常用的试剂为二硝基氟苯，丹磺酰 氯，测定羧基末端氨基酸常用羧肽酶，Edman降解法测氨基酸排列顺序用的是异硫氰酸苯 酯。 二、维持球蛋白三级结构稳定的最重要的键或作用力是（）（1995北医） A。二硫键 B。盐键 C。氢键D。范德华力 E。疏水键 答案：E 考点：维持蛋白质结构的化学键 解析：维持蛋白质一级结构的主要是肽键，二级结构主要是氢键，三级和四级结构靠次级键 维持，这其中最主要的是疏水作用，疏水键、盐键、氢键、范德华力、二硫键都参与三级结 构的形成，要区分这些化学键的含义：蛋白质中众多疏水基团之间的作用力即为疏水键；酸 性和碱性氨基酸可带电荷，正负电荷相互作用形成盐键；与氢共用电子对形成的键为氢键； 半胱氨酸之间可以二硫键结合。 三、下列关于蛋白质的叙述，哪一项不正确（）（1995北医） A。蛋白质的糖基化或磷酸化可影响蛋白质的构象 B。β—片层的形成需要二硫键 C。加入硫酸铵可使溶液中蛋白质变性 D。有些蛋白质可以两种不同构象存在 E。肽键的部分双键特性对蛋白质的二级结构形成极为重要 答案：B 考点：蛋白质的空间结构组成 解析：首先要明确构象与构型的区别，一般来说构型改变需要涉及共价键的断裂与生成，而 构象的改变无需共价键破坏，只需单键的旋转和非共价键改变就可形成新的构象，蛋白质中 共价键常指的是肽键，蛋白质的变构调节和共价修饰都可引起构象改变，故A、D是正确的， 其次要记住蛋白质各级结构中主要的化学键，象 β 片层二级结构之间主要是氢键，所以 B 是错的，肽键的部分双键特性对形成肽单元是重要的，对二级结构的形成也是重要的。 四、某种酶的活性需要解离的异吡唑基和巯基，当底物含赖氨酸残基时�